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    酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。


ELISA实验大致分为以下几类:直接法、间接法、夹心法、竞争抑制法。直接法在所有ELISA实验中操作步骤最简洁;间接法通过信号的两步放大则提高了检测的灵敏度;夹心的操作过程比价繁琐,因其较高的灵敏度在低丰度抗原的样品中应用广泛;竞争抑制法对试剂的要求非常少,不管是单抗还是多抗都可以用于实验。

随着检测灵敏度的提高,相应ELISA实验方法也变得繁琐,但不管哪一种实验方式,其实验步骤都由以下几项基本操作组合而成的:

        

ELISA实验是一项非常考验操作者耐心和细心程度的工作。操作者,必须对上述步骤烂熟于心,灵活处置,特别是面对更复杂的实验,如竞争抑制法ELISA,应在实验之前就对整个实验充分了解,并且十分清楚预期实验结果。实验过程中可能会出现某些失误,包括未能意识到的和因为偷懒未按正确步骤导致的失误,都为实验结果出现偏差甚至失败埋下祸根。



ELISA实验经常会出现以下问题,下面是问题现象和可能的原因分析:

1)显色极浅或不显色

A、酶标物加错或者漏加以及分液量不足;

B、底物漏加、底物失效、底物配置浓度计算错误

C、使用的微孔板与试剂不匹配;

2)全板阳性

A、酶标抗原或抗体浓度过高,尝试降低浓度;

B、洗板过程不彻底,酶标物残留;

C、底物被酶标抗体或抗原污染。

3)显色不均匀

A、酶标板质量问题,重新检测酶标板均一性;

B、加样过程中有部分孔漏加、少加等情况,经常是操作者不细心;

C、加样时移液器打入太多气泡;

D、加样或稀释过程中试剂没有充分混匀,或稀释梯度计算错误;

E、洗板失误,部分孔未加洗涤液或洗涤液加入去垢剂后未充分混匀,或洗涤过程中带入气泡。

4)显色过快

A、酶标抗原或抗体浓度过高;

B、某一试剂浓度过高。

5)显色过慢

A、酶标抗原或抗体浓度过低,或标记效率低,或标记后免疫活性受影响;

B、试剂被污染,如HRP酶标记的抗原或抗体被叠氮钠污染;

C、反应温度过低;

D、底物缓冲液PH值不正确。

6)背景深

A、酶标抗原或抗体浓度过高;

B、抗体的非特异性结合;

C、抗原或抗体不纯;

D、二抗的种属交叉识别。

   
    ELISA实验重复而又枯燥,人工操作出现失误几乎是不可避免的,可以说几乎90%的实验失败原因是操作失误引起的。随着自动化技术的发展,一些半自动或全自动的实验设备开始出现在人们的视野,极大的提升了工作效率。我司推出的系列全自动酶免工作站专门针对酶联免疫实验过程,其全自动的特点极大地减少了操作人员对样本的直接接触,一方面降低了实验操作失误的可能性,另一方面也是对操作人员的一种安全防护。

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